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淺談小鼠結腸癌細胞的傳代方法

更新時間:2014-06-25      點擊次數:3140
淺談小鼠結腸癌細胞的傳代方法
小鼠結腸癌細胞培養條件:*培養基:DMEM高糖培養基90%;胎牛血清10%。
小鼠結腸癌細胞培養條件:37.0C  carbon dioxide(CO2),5%
小鼠結腸癌細胞傳代方法:
收到細胞后,取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。
一、如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,吸出培養液,僅留下10ml培養液在瓶內繼續培養。
二、如果細胞已長滿,即可進行傳代培養。具體步驟如下:
1、棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2、加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱,然后又將培養瓶倒轉大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養培養瓶,細胞隨即脫落下來。
3、加入6-8ml*培養基,吸出,分到新的培養瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次?!?/div>
小鼠結腸癌細胞傳代方法時需要注意的事項:傳代后一半用我們的培養基,一半用你們的,以免細胞不適應而造成生長不好。
凍存方法:凍存液:基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
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